图1  血清饥饿对HEK293细胞蛋白表达的影响

血清饥饿是一种使细胞同步化分裂的方法。通过降低培养液中的血清浓度，使培养细胞因缺乏血清生长因子而不能分裂，一定时间后再加入血清，细胞就开始同步生长分裂了。该方法可将细胞周期阻滞在G0/G1期，在此基础上进行的后继处理及细胞周期变化分析，结果更有说服力。无血清培养可使细胞处于饥饿状态，在加入药物后可更好的吸收药物，有助于药物作用的发挥。

图2信号通路抑制剂U0126对HEK293细胞蛋白表达的影响

市健研中心分子医学实验室采用血清饥饿的方法在体外模拟HEK293细胞营养缺乏的生长环境，观察其相应的细胞适应性反应，蛋白质印迹法（Western Blotting）测定干预前后细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase，Erk/MAPK)的表达及磷酸化水平变化。在血清饥饿HEK293细胞24h、48h后提取蛋白，检测基因在蛋白水平的相对表达量（结果见图1所示）。在培养细胞中加入Erk通路抑制剂U0126（0uM、2.5uM、5uM、10uM、20uM、50uM），结果见图2所示。蛋白质印迹法结果表明，血清能显著刺激饥饿细胞中Erk的磷酸化，但对Erk总蛋白的表达没有显著影响。而Erk通路抑制剂U0126则明显抑制Erk的磷酸化过程，浓度越高，抑制作用越强，呈现了显著的浓度依赖性，并且Erk总蛋白量同样无统计学意义差异。这些都是细胞应对生存环境变化，胞内通路活性做出的适应性反应。

MAPK信号通路在细胞癌变和肿瘤浸润转移过程中起着重要的调控作用，Erk磷酸化是其中的关键环节。目前在肝癌、头颈部鳞癌及PCa等多种肿瘤组织中均发现了Erk异常表达，这表明Erk通路的过度活化可能促进了肿瘤的发生、发展以及肿瘤的侵袭转移。

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消息来源：深圳市卫生健康发展研究中心