12年前，33岁的朱女士利用试管婴儿技术成功生下一名男孩，多余的11个胚胎被冷冻储藏了起来。受益于全面二孩政策的实施，其中的一枚在熬过了漫长的“冻龄”阶段后，将成功分娩。

广州医科大学附属第三医院生殖医学中心成功将3枚冷存12年胚胎解冻复苏，并植入产妇体内。在经历了减胎等程序后，已45岁高龄的朱女士已成功怀孕12周。

据悉，冷冻如此长时间后复苏、植入，该“冻龄”宝宝将有望成为国内冷冻时间最长（12年）的“冰宝宝”。

33岁促排卵治疗，获得13个有效胚胎

据介绍，朱女士来自广东罗定，因双侧输卵管堵色，婚后多年不育，2004年3月份在广医三院接受过试管婴技术操作，同年12月成功生下一名健康男婴。

由于朱女士对药物比较敏感，使用促排卵药物后，当时生殖中心一共取得19个健康卵子细胞。在与其丈夫的精子结合后，获得了13个有效健康的胚胎。

“当时植入了两个胚胎，成功的生下男孩后，朱女士剩余的11个健康胚胎被冷冻保存了起来”，广医三院生殖医学中心副主任医师许海燕告诉记者，和当时许多已经成功分娩的试管婴操作夫妻一样，朱女士成功生下孩子后，对于剩下的11个封存胚胎并没有太过留意。

去年年底即将实施全面二孩政策时，许多被当初父母遗忘的小胚胎，纷纷被回想起来，政策全面实施后，大量的又解冻、复苏，植入母体。

朱女士正是其中之一。今年3月，已然45岁的她，再次找到了许海燕询问陪他的保存情况，很万幸，在没有缴费保存的情况下，医院一直为这11个小生命提供冷冻保存服务。这些小家伙们依然静静地呆在零下200多度的液氮罐中，等待复苏的机会。

朱女士主动续缴了积欠105个月的保管费用，决定在45岁高龄进行生育第二孩的尝试。据了解，像朱女士这样的情况并非个别。自“全面二孩”放开后，来医院生殖医学中心咨询的人明显增加了。咨询者年龄段以70后居多，他们大多曾经在该中心做过试管婴儿，有胚胎在中心冷冻保存。           

7个胚胎解冻后，3个胚胎最健康

根据基本信息，中心医护人员成功找到了朱女士当时冻存的“胚胎”，用复苏技术为冷冻胚胎注水、唤醒后，在通过显微镜、肉眼来观察复苏胚胎的形态，并据此甄别胚胎的健康程度。“所取的7个胚胎中，有3个形态饱满、正常，符合植入的相关要求。”

许海燕表示，广医三院从2001年开始提供冷冻胚胎相关的保存服务。21世纪初期，生殖医学领域还没有发现玻璃化冷冻技术时，所采取的是机械程式化冷冻方式——一个胚胎的脱水过程，往往需要按照既定程式缓慢进行，长达数小时之久。即便如此，脱水的效果也比较一般。而一旦胚胎中脱水不够彻底，内容的液体形成锋利的冰晶后，容易损伤内容物，从而影响细胞质量。

统计显示，在使用老旧脱水、冷冻方法时，其解冻复苏的成功率约为60%左右，国内外水平相当。在澳洲专家发明玻璃化冷冻技术，能够在短短数秒时间内完成胚胎、生殖细胞的快速冷冻后，相关的复苏成功率则达到了95％以上。事实上，由于许多女患者在促排卵后，卵巢功能、体内的孕激素、雌激素水平较为异常，并不适宜马上操作试管婴儿。取卵后需要马上进行体外受精、胚胎培育，随后，不能马上进行植入的胚胎也大多进行短期冷冻封存，等女患者的激素水平、身体状况达标后再进行植入操作。

“目前，我们中心每月进行的约600个周期（周期，是指一个女性取卵到胚胎植入的过程。不管有没成功，不管放多少胚胎，生多少孩子都是一个周期。如该周期没有成功，再次进行胚胎植入就进入另一个周期了）的胚胎植入中，完全适用新鲜胚胎进行植入只有200例左右，使用冷冻胚胎植入的冰宝宝则达到300-400例。每月解冻的冰宝宝数就有近千个。冷冻胚胎植入后的成功抱婴回家率，和新鲜胚胎并没太大差异。”

植入后全部存活，为安全减至一胎

获得了三个唤醒的胚胎后 ，许海燕安排朱女士进行胚胎植入手术。术后15天左右观察可见，三个12年前的胚胎依然保持着旺盛的生命力，全部存活。

朱女士45岁的高龄，成为此次分娩的最大障碍。“从优生优育的角度来看，女性怀孕的年龄越大，胚胎异常发生的机率就越大，而且怀孕后流产率高，承担着非常大的风险。同时，在怀孕期间，出现高血压、糖尿病等妊娠合并症的发生率也会随之增加。虽然没有怀孕的极限年龄，但是最好在35岁之前怀孕”。

许海燕在历次门诊随访中，都建议朱女士减胎。朱女士也不想在如此高龄承担三倍于常规怀孕的压力，选择了将3胞胎减少到一个胎儿。

高龄相关的问题还是显现了，本身身体状况还不错的朱女士，在怀上了三个小宝宝后，出现了一些先兆流产的症状，此时进行减胎操作，会加大流产的风险。许海燕和朱女士决定先进行对症处理——保胎。这一等，朱女士的孕周期已经达到11周以上，情况稳定后，其减胎手术需到医院的产前诊断科进行。

6月8日进行了减胎操作，13日又进行了减胎手术后的多次影像观察。“这次手术进行的非常成功，由于患者使用的是12年前前更为年轻、活力的冷冻胚胎，本身发生染色体异常的几率就要低许多。再考虑到患者目前已经过了流产高风险期，朱女士这次成功分娩二孩的几率很高”，医院产前诊断专家陈敏在为其手术后表示，这也意味着大约六个月后，朱女士将分娩我国冻存时间最长的一个冰宝宝。这个幸运的孩子，因为在液氮罐冻龄12年，其出生年龄要比自己的孪生哥哥年轻12岁。

而根据检索，此前中国冻龄最长的一位冰宝宝是去年青岛为一名47岁患者植入的冻龄10年的胚胎。而在英国、澳大利亚等国家和地区，冻龄超过16年的冰宝宝也时有出现。

恩，说了这么多，你一定很好奇胚胎冰冻及受孕过程是怎么操作的~

胚胎冰冻及受孕过程

第一步 取卵

目前的促排卵药物对人体的内分泌机制分析已经很透彻了，即便刚刚来过例假，也可以马上进行药物促排卵，从使用药物的10-12天开始，便可以使用微创技术进行取卵，一般取出数量为10个左右。

第二步 卵泡清洗和去除颗粒

查看卵子的成熟程度，去除颗粒细胞后便于用来保护卵子的保护剂进入细胞。

第三步 精子处理

从提取的丈夫一方精子中，使用显微观察，捕捉到形态最好，最具活力的一只“蝌蚪”予以逮捕。用针头吸入针管。

第四步 卵子单精子注射

将捕捉到的活跃精子，注射入卵子当中，完成体外人工辅助生殖操作。                                                                                 

第五步 受精卵及胚胎培养

完成受精后，在特定环境下进行胚胎培养3-5天，考虑到细胞分裂的时间、速度，一般在第三天时，最初的单一受精卵大约分裂为8个细胞。随后进入快速分裂期，细胞数呈集合级数增长。到了第5天时，已经发育成有2的N次方个细胞后，即为合格胚胎。

第六步 胚胎玻璃化冷冻

分梯度由低到高使用对应浓度、渗透压的药剂进行脱水，全部脱水冷冻过程仅需5分钟时间。

第七步 液氮罐冷冻保存

将脱水胚胎放置在零下196℃的液氮罐子里进行冷冻保存。原则上可以无限期保存，前提是温度一直处于零下196℃。

第八步 胚胎解冻

当需要使用胚胎时，从液化氮中取出胚胎，分梯度使用药剂，按照由高到低使用对应浓度、渗透压的药剂进行复原，全部过程可以快速完成。

第九步 胚胎植入

选取合适胚胎，植入到女性宫腔内。15天后，进行验孕操作，判断是否成功怀上孩子。

冻了这么长时间，冰宝宝健康吗？

接近绝对零度的极低温度下待了这么长时间，冰宝宝的健康状况，是否会比新鲜胚胎要差些？目前国际、国内的相关研究还在进行。试管婴技术从1978年才面世，迄今不到40年，使用冷冻胚胎进行操作的相关技术，开展的时间更短。生殖医学中心主任刘见桥表示：“截至目前，医学界还没有发现使用冷冻胚胎的冰宝宝，在智力、发育等领域会表现出与新鲜胚胎上的差异。正如同试管婴儿技术孕育的孩子，并不比普通孩子更笨、更弱一样。”

不仅如此，由于冷冻胚胎的形成时间，往往处于父母更年轻的时段，其发生遗传变异的可能性反而更低。如果一名女性在30岁前取出卵细胞进行受精，然后将胚胎进行冷冻保存。在35岁后再移植怀孕，那么，这个来自于30岁身体的卵细胞，极可能会比高龄时发育的卵细胞缺陷率低。许海燕表示，女性年龄越大，异常卵子产生的比例越高，胚胎异常比例及畸形胎率也就越高，流产的比例也相当大。

以朱女士为例，其33岁时冻存的胚胎，发生唐氏综合征等染色体异常疾病的风险极低，但如果是45岁再来取卵做胚胎，其发生染色体异常的风险则高达80%以上。年轻时的冷冻胚胎较高龄时获得的新鲜胚胎大多数质量会好一些。

但我国对人工辅助生殖技术的管控一直严格、有序。能够进行胚胎冷冻的，只有已婚不孕夫妇并且检查出输卵管阻塞、少弱精症、子宫内膜异位症中的一种或多种，抑或通过其他治疗仍无法自然怀孕，才允许进行体外受精-胚胎移植（俗称试管婴儿）辅助生殖技术，从而得到卵子和胚胎冷冻的机会。无相关指征的夫妇，尤其是未婚人士，按目前的国家管理条例是不允许进行辅助生殖技术治疗的。

同时，我国也严禁在没有手术指征情况下对男、女性的生殖细胞进行冷冻保存。明星徐静蕾要冷冻自己的卵子细胞，最终都选择了在国外进行。

胚胎如何冷冻和“复活”？

冷冻精子的技术很成熟，应用也较广泛。冷冻胚胎在我国的推广上也大致雷同。随着玻璃化冷冻技术的发明应用，胚胎快速冷冻、解冻成功率已大大提升。

生殖助孕中心实验室主任杜红姿介绍说，胚胎的冷冻，关键是脱水和注水的相关细节需要处理好。构成细小胚胎的内容物中，除了各类生命物质，最主要的就是水，它们在冷冻卵子的过程中，成了最需要克服的瓶颈。

“水分过多，冷冻过程中，水由液体变成固体的过程中，会形成棱角分明的冰晶。这些细微的棱角，极可能成为破坏卵子细胞中物质的元凶。”杜红姿表示，细胞里的水分过少也不行，失去水分的支持，虽然便于保存，但细胞就会完全死掉。

冷冻胚胎和生殖细胞精子、卵子的技术由来已久，最早是为了满足畜牧业对珍稀动物的保护和配种用途，上世纪60-70年代开始研究。1986年真正第一次应用于人工辅助生殖技术，其中尤其以卵子细胞冷冻、解冻最为复杂。当时澳大利亚专家第一次复苏了冷冻卵子，并成功形成胚胎、受孕，最后诞生了第一个被称为“冰宝宝”(又被称为“时光婴儿”)的通过冰冻卵子孕育的试管婴儿。但当时的专家发现，冻卵的复苏率很低，做试管婴儿时的成功率也远低于新鲜卵子。而冷冻胚胎的解冻复苏更简单，成功率也高于冷冻卵子。直到发明了快速脱水和极速冷冻方法，卵子冷冻复苏问题才得到有效解决，也带动了胚胎冷冻复苏的成功率提高。

冷冻：用试剂控制脱水过程 1秒钟降到零下196℃

中学生物课都做过这样的实验：将一株植物放置在浓度很高的盐水中，植物会慢慢枯萎。盐水和植物自身水分之间存在的渗透压，会让植物水分突破细胞壁，向外环境逃逸。

动物细胞虽然只有细胞膜，但也存在类似的渗透压。正是基于这样的原理，生殖医生可以对胚胎进行脱水冷冻。先将其放置到细胞培养液和专业器皿中30分钟左右，随后一种15毫升装、售价2800元的脱水试剂“上场”。这种试剂主要是乙二醇、二甲基亚砜类物质，已被证实在脱水过程中对胚胎的安全危害性极小。

先用浓度低、渗透压低的试剂，胚胎开始快速脱水；再上浓度高、渗透压力高的试剂，让脱水过程可控，保留一定水分。随后，在1秒钟内让脱水后的胚胎由室温降低到零下196℃。细胞内的液体不再是冰晶，而是玻璃化的固态物质，对胚胎的损害也就降到了较低水平。

复活：给胚胎“注水”在模拟人体环境待4小时

而让冷冻胚胎快速复活的过程，则是将上述昂贵试剂的浓度由高向低进行反向操作。为保证水分缓慢进入解冻后的胚胎，高渗透压、高浓度的解冻试剂先上，让外部环境的洁净水分、培养液慢慢进入胚胎中。接着上浓度稍低的试剂，又渗透进一些水分、培养液；当第四组渗透压和浓度均为最低的试剂“上场”时，给胚胎细胞“注水”的过程也就完成了。

随后，生殖医学专家还会将这些复苏的胚胎，放置在37℃、二氧化碳浓度6%、湿度95%以上的培养液中待上4个小时。在模拟出来的人体环境待上足够长时间后，感觉回到熟悉环境的胚胎才终于“满血复活”。之后，能否成功分娩出试管婴儿，就要看胚胎质量、生殖系统状况等因素了。

【通讯员】黄贤君  白恬

【摄影】谭庆驹

【来源】南方都市报